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酶標儀原理簡介

酶標儀簡介：

酶標儀即酶聯(lián)免疫檢測儀是酶聯(lián)免疫吸附試驗的儀器又稱微孔板檢測器?？珊唵蔚胤譃榘胱詣雍腿詣?大類，但其工作原理基本上都是一致的，其核心都是一個比色計,即用比色法來進行分析。測定一般要求測試液的zui終體積在250μL以下，用一般光電比色計無法完成測試，因此對酶標儀中的光電比色計有特殊要求。

酶標儀原理：

酶標儀實際上就是一臺變相光電比色計或分光光度計，其基本工作原理與主要結(jié)構(gòu)和光電比色計基本相同，圖示是一種單通道自動進樣的酶標儀工作原理圖光源燈發(fā)出的光波經(jīng)過濾光片或單色器變成一束單色光，進入塑料微孔極中的待測標本該單色光一部分被標本吸收，另一部分則透過標本照射到光電檢測器上，光電檢測器將這一待測標本不同而強弱不同的光信號轉(zhuǎn)換成相應的電信號，電信號經(jīng)前置放大，對數(shù)放大，模數(shù)轉(zhuǎn)換等信號處理后送入微處理器進行數(shù)據(jù)處理和計算，zui后由顯示器和打印機顯示結(jié)果。微處理機還通過控制電路控制機械驅(qū)動機構(gòu)X方向和Y方向的運動來移動微孔板，從而實現(xiàn)自動進樣檢測過程而另一些酶標儀則是采用手工移動微孔板進行檢測，因此省去了X,Y方向的機械驅(qū)動機構(gòu)和控制電路，從而使儀器更小巧，結(jié)構(gòu)也更簡單。

微孔板是一種經(jīng)事先包理于放置待測樣本的透明塑料板，板上有多排大小均勻一致的小孔，孔內(nèi)都包埋著相應的抗原或抗體，微孔板上每個小孔可盛放零點幾毫升的溶液。

光是電磁波，波長100nm~400nm稱為紫外光，400nm~780nm之間的光可被人眼觀察到，大于780nm稱為紅外光。人們之所以能夠看到色彩，是因為光照射到物體上被物體反射回來。綠色植物之所以是綠色，是因為植物吸收的大部分為紅橙光和藍紫光，但對綠色不吸收，反射出來，所以植物呈現(xiàn)為綠色。酶標儀測定的原理是在特定波長下，檢測被測物的吸光值。

隨著檢測方式的發(fā)展，擁有多種檢測模式的單體臺式酶標儀叫做多功能酶標儀，可檢測吸光度(Abs)、熒光強度(FI)、時間分辨熒光(TRF)、熒光偏振(FP)、和化學發(fā)光(Lum)。 

酶標儀從原理上可以分為光柵型酶標儀和濾光片型酶標儀。光柵型酶標儀可以截取光源波長范圍內(nèi)的任意波長，而濾光片型酶標儀則根據(jù)選配的濾光片，只能截取特定波長進行檢測。

檢測單位

光通過被檢測物，前后的能量差異即是被檢測物吸收掉的能量，特定波長下，同一種被檢測物的濃度與被吸收的能量成定量關系。檢測單位用OD值表示，OD是optical density(光密度)的縮寫，表示被檢測物吸收掉的光密度，OD=log(1/trans)，其中 trans為檢測物的透光值。根據(jù)Bouger-amberT-beer法則，OD值與光強度成下述關系：

E=OD=log(lo/Ι) 

其中E表示被吸收的光密度，Ιo 為在檢測物之前的光強度，Ι為從被檢測物出來的光強度。OD值由下述公式計算：

c為檢測物的濃度       b為檢測物的厚度        a為摩爾因子

在特定波長下測定每一種物質(zhì)都有其特定的波長，在此波長下，此物質(zhì)能夠吸收zui多的光能量。如果選擇其它的波長段，就會造成檢測結(jié)果的不準確。因此，在測定檢測物時，我們選擇特定的波長進行檢測，稱為測量波長。

但是每一種物質(zhì)對光能量還存在一定的非特異性吸收，為了消除這種非特異性吸收，我們再選取一個參照波長，以消除這個不準確性。在參照波長下，檢測物光的吸收zui小。檢測波長和參照波長的吸光值之差可以消除非特異性吸收。

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